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顯微標本制作技術是組織學、胚胎學、生理學及細胞學等學科研究觀察細胞、組織的生理、病理形態變化的一種主要方法。大多數的生物材料,在自然狀態下是不適合顯微觀察的,也無法看到其內部結構。在經過固定、脫水、透明、包埋等手續后就可把材料切成較薄的片,再用不同的染色方法就可以顯示不同細胞組織的形態及其中某些化學成份含量的變化,就可以在顯微鏡下清楚地看到其中不同的區域組分狀態,切片也便于保存,所以是教學和科研中常用的方法。
顯微標本制作有許多不同的方法,一般可分為非切片法與切片法兩大類:非切片法有涂片、鋪片、壓片、磨片、整裝片等;切片法又包括石蠟切片法、火棉膠切片法、冰凍切片法等。
顯微標本制作技術雖是生物學中很基本的操作技術,但由于生物材料的個體差異、化學試劑的多樣性,因此操作技術相當細致而復雜,方法也很多,每一步驟的失誤都可導致整體的失敗,因此需要耐心細致,不斷總結經驗,才能得到較好的結果。
切片法是必須依靠手或切片機將組織切成薄片來進行觀察的方法。為了能清晰地觀察到動、植物的組織結構及細胞形態,必須先經過一系列步驟將組織內滲入某些支持物質,使組織變硬以利于切成薄片,根據所用支持劑的種類不同,可分為徒手切片法、石蠟切片法、火棉膠切法、冰凍切片法等類型,切成薄片后還需要去蠟,染色、脫水、透明等步驟,將其制成永久標本。
下邊以石蠟切片為例,介紹顯微標本制作方法。
修塊:切片前需修整蠟塊,即將包埋好的一大塊蠟塊切開,使每一小塊都含有一塊組織,并將這組織周圍的石蠟切除,將組織修成一小塊蠟塊并粘在大小適宜的硬木塊上,以便于固定在切片機上。
貼片:一手持毛筆,一手轉動切片機,切片的蠟片連成一長條蠟帶
切下的蠟帶放在一干凈黑紙上,用小刀根據需要切成數段,分別貼在干凈載玻片上。在恒溫展片臺上展平、烘干。